P-糖蛋白高表达马丁达比狗肾上皮细胞系的建立

摘要：

目的 为建立能稳定表达人P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)的马丁达比狗肾上皮(Madin-Darby canine kidney,MDCK)细胞转基因细胞系,并鉴定其是否适用于药物转运实验.方法 将质粒pcDNA3.1(+)/MDR1通过LipofectamineTM 2000转染试剂转染犬肾上皮细胞MDCK,经G418筛选获得抗性克隆.通过P-gp的荧光底物罗丹明(Rhodamine123,Rho123)在各单克隆细胞内的积聚量以及维拉帕米存在时细胞内积聚量检测P-gp的活性.反转录聚合酶链式反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)和蛋白免疫印迹(Western blot)检测人源多药耐药基因1(multidrug resistance 1,MDRI)的mRNA和P-gp表达量.应用筛选出的MDCK-MDR1单克隆细胞株,研究了Rho123在MDCK和MDCK-MDR1(Madin-Darby canine kidney/multidrug resistance 1)细胞中的转运及4种经典抑制剂(维拉帕米、环孢素、酮康唑和奎宁)对Rho123转运的抑制特性.结果 RT-PCR和Western blot检测表明,所建立的MDCK-MDR1细胞与MDCK细胞相比,经转染后MDCK细胞内的MDR1的信使核糖核酸(messenger ribonucleic acid,mRNA)和P-gp表达发生从无到有的变化.Rho123在MDCK和MDCK-MDR1中的外排系数分别是5.94和15.45,抑制剂能显著地抑制细胞外排作用.结论 转染后的细胞高表达P-gp,适用于研究药物的肠道和血脑屏障转运实验.

关键词：马丁达比狗肾上皮细胞、多药耐药基因1、P-糖蛋白、转运、外排

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分类号：R915(药物基础科学)

资助基金：国家重大科研专项;临床前药物代谢动力学技术平台2009ZX09304-003

在线出版日期：2010-01-05（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：1608-1613