10.3321/j.issn:1001-2494.2009.06.003
重组人胰高血糖素样肽前药的表达、纯化及生物活性分析
目的 建立重组人胰高血糖素样肽前药(prodrug of recombinant human GLPs,Pro-rhGLPs)的表达、纯化方法,研究Pro-rhGLPs对体内血糖水平及血清胰岛素水平的影响.方法 采用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG,0.01 mmol·L-1)诱导原核表达系统E.coli BL21(DE3)/pET32a(+)-hGLPs表达Pro+rhGLPs,12%SDS-PAGE检测蛋白表达量,Ni-NTA亲和层析纯化Pro-rhGLPs,应用Western blot在体外观察前体药物的活性分子释放过程.在C57BL/6小鼠上进行葡萄糖耐量实验检测其生物学活性,不同时间间隔取血测定血糖及血清胰岛素水平.在糖尿病db/db小鼠上观察其降糖作用.结果 所构建的Pro-rhGLPs原核表达系统中,Pro-rhGLPs表达量约为细菌总蛋白的50%.纯化得到的蛋白纯度达到95.43%,并且可以在特异性酶作用下缓慢降解,释放出多个胰高血糖素样肽1(GLP-1)分子.纯化的Pro-rhGLPs呈剂量依赖性降低血糖浓度,同时升高血清胰岛素水平.等剂量Pro-rhGLPs的降糖作用较GLP-1作用更强.结论 建立了Pro-rhGLPs高效表达、纯化方法,获得了高纯度Pro-rhGLPs,对糖尿病小鼠具有明显的降血糖作用.
糖尿病、人胰高血糖素样肽1、重组蛋白、前体药物
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R966(药理学)
陕西省国际合作重点项目;西安市重大攻关专项项目
2009-05-12(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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