重组葡萄球菌肠毒素B蛋白表达、纯化及生物活性的实验研究

摘要：

目的 建立重组葡萄球菌肠毒素B(staphylococcal enterotoxin B,SEB)表达、纯化方法,了解rSEB细胞毒性、促淋巴细胞增殖和抑制肿瘤生长的作用.方法 采用IPTG(1.0 mmol·L-1)诱导SEB原核表达系统pET32α-SEB-E.coliBL21DE3表达rSEB,10%SDS-PAGE检测其产量,Ni-NTA亲和色谱法纯化rSEB.采用Veto细胞测定rSEB的细胞毒性作用,并计算TCIC50值.通过MTT法分别检测不同浓度rSEB体外促淋巴细胞增殖作用,以及对肿瘤细胞株HepG2、HeLa的生长抑制作用.结果 所构建的SEB原核表达系统中,rSEB表达量约为细菌总蛋白的40%,主要以包涵体形式存在.纯化的rSEB对Vem细胞的TCIC50为3.02μg.5.0～μ20.0 mg·L-1的rSEB对小鼠脾细胞和人PBMC均有明显的促增殖作用(P<0.05).5.0～20.0 mg·L-1 rSEB作用的人PBMC上清均能有效地抑制HepG2细胞和HeLa细胞生长(P<0.05).结论 建立了SEB高效表达、纯化方法,获得rSEB蛋白.所建立的细胞毒性、促淋巴细胞增殖和抑制肿瘤细胞生长作用的检测方法,为后续进一步分析SEB分子中相关活性位点及其减毒SEB突变体的筛选奠定了基础.

关键词：葡萄球菌肠毒素B、重组蛋白、细胞毒性、淋巴细胞增殖、抑制肿瘤细胞

所属期刊栏目：43

分类号：R915(药物基础科学)

资助基金：浙江省科技计划项目2003C34010;嘉兴市科技计划项目20041023

在线出版日期：2008-07-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：568-572