稳定过表达XAF1基因鼻咽癌放射抗拒CNE-2R细胞株的构建

摘要：

目的：构建稳定过表达X连锁凋亡抑制蛋白相关因子1（ X-linked inhibitor of apoptosis associated factor 1，XAF1）基因的鼻咽癌放射抗拒CNE-2R细胞株。方法分别将携带XAF1基因感染复数（ multiplicity of infection，MOI）为50的慢病毒稀释液、MOI为100的慢病毒原液和MOI为100的慢病毒原液加入终浓度为5μg/mL的聚凝胺（ polybrene）转染人鼻咽癌放射抗拒CNE-2R细胞株。通过倒置荧光显微镜观察细胞内荧光数量及强度评判转染效率，通过实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（ real-time quantitative reversetranscription polymerase chain reaction，qRT-PCR）和蛋白免疫印记法（ western blot）检测XAF1基因mRNA和蛋白的表达。结果慢病毒稀释液转染，约60％的细胞可观察到微弱荧光；慢病毒原液转染，约70％的细胞观察到较弱荧光；慢病毒原液加入5μg/mL polybrene的转染效率较高，约90％的细胞观察到较强荧光。嘌呤霉素筛选上述转染效率最高的慢病毒原液加5μg/mL polybrene组细胞，其成功将携带XAF1基因的慢病毒转入鼻咽癌放射抗拒CNE-2R细胞株。 qRT-PCR和western blot进一步证实细胞株稳定过表达XAF1基因。结论慢病毒加polybrene转染可成功构建稳定过表达XAF1基因的鼻咽癌放射抗拒CNE-2R细胞株。

关键词：鼻咽肿瘤、X连锁凋亡抑制蛋白相关因子1、慢病毒载体、鼻咽癌放射抗拒细胞、基因转染、荧光效率

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分类号：R739.63(肿瘤学)

资助基金：区域性高发肿瘤早期防治研究广西重点实验室研究资助项目 GK2015-ZZ07；广西医科大学青年科学基金资助项目GX-MUYSF201317

在线出版日期：2017-03-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：349-353