携带绿色荧光报告基因EBV-LMP2A真核表达载体构建及转染鼻咽癌细胞

摘要：

目的 构建携带绿色荧光基因的真核表达载体pIRES2-Zs-Green1-LMP2A,并转染至鼻咽癌CNE2细胞.方法 从EB病毒阳性的狨猴淋巴瘤细胞B95-8中克隆EB病毒编码的EBV潜伏膜蛋白2A(latent membrane protein 2A,LMP2A)序列,并定向克隆入pIRES2-Zs-Green1载体,双酶切及测序鉴定重组的真核表达载体pIRES2-Zs-Green 1-LMP2A;通过脂质体转染将重组的真核表达载体pIRES2-Zs-Green1-LMP2A转染至鼻咽癌CNE2细胞(实验组),同时另设转染pIRES2-Zs-Green1载体的阴性对照组及未转染的空白对照组.利用质粒所携带的绿色荧光蛋白表达计算细胞转染效率,RT-PCR检测目的基因LMP2A在鼻咽癌CNE2细胞中的表达.结果 双酶切及测序鉴定证实真核表达载体pIRES2-Zs-Green1-LMP2A构建成功,荧光显微镜下发现实验组和阴性对照组细胞均发出绿色荧光,实验组细胞转染率约为75％;RT-PCR检测发现实验组细胞中有目的基因LMP2A表达,但阴性对照组和空白对照组均未检测到目的基因表达.结论 成功构建了pIRES2-Zs-Green1-LMP2A真核表达载体并转染鼻咽癌CNE2细胞,目的基因LMP2A可在转染的鼻咽癌CNE2细胞中稳定表达.

关键词：鼻咽肿瘤、EBV潜伏膜蛋白2A、序列克隆、pIRES2-Zs-Green1载体、pIRES2-Zs-Green1-LMP2A真核表达载体、基因转染、基因表达

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分类号：R739.6(肿瘤学)

资助基金：国家自然科学基金资助项目81260405;广西区域性高发肿瘤早期防治研究重点实验室基金项目GK2013-A-02-02

在线出版日期：2016-10-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：207-211