β-catenin过表达鼻咽癌CNE2细胞模型的构建

摘要：

目的 构建β-catenin真核表达载体pc DNA3.1(+)/β-catenin并转染鼻咽癌CNE2细胞,检测β-catenin在CNE2细胞中的表达.方法 反转录-聚合酶链式扩增反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)扩增目的基因β-catenin,胶回收纯化后克隆至pGEM-T Easy载体,挑选阳性克隆,抽提质粒进行kpn Ⅰ/xba Ⅰ双酶切和PCR鉴定,用T4 DNA连接酶将目的基因β-catenin与真核表达载体pcDNA3.1/Hygro(+)连接,构建重组的真核表达载体pcDNA3.1(+)/β-catenin,转化感受态细胞DH5α,再次抽提质粒进行PCR、kpn Ⅰ/xba Ⅰ双酶切和测序鉴定,然后用FuGENE HD将纯化的pcDNA3.1(+)/β-catenin转染入鼻咽癌CNE2细胞,经Hygromycin B筛选,采用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法(Western blot)验证转染细胞CNE2/β-catenin中β-catenin的表达.结果 PCR、双酶切及测序鉴定表明,成功构建了真核表达载体pcDNA3.1(+)/β-catenin;实时荧光定量PCR和Western blot检测表明,与未转染细胞CNE2比较,被转染的CNE2/β-catenin细胞能够上调目的基因β-catenin的表达(P＜0.01).结论 成功构建真核表达载体pc DN A3.1(+)/β-catenin,并能在转染的CNE2/β-catenin细胞上调目的基因β-catenin的表达.

关键词：鼻咽肿瘤、真核表达载体、β-catenin、细胞模型

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分类号：R739.6(肿瘤学)

资助基金：福建省自然科学基金资助项目2014J01299;福建省科技计划重点项目2014Y0014;国家临床重点专科建设项目国卫办医函2013554号

在线出版日期：2016-10-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：201-206