肝癌相关抗原H2-calponin基因重组质粒的构建与表达

摘要：

目的 应用基因工程的方法构建H2-calponin(CNN2)基因工程表达质粒,体外表达、分离、纯化CNN2蛋白.方法 以PCR扩增CNN2cDNA序列,用基因工程技术将CNN2基因重组到表达质粒pCold Ⅲ中,转化BL21(DE3)pLysS宿主菌,以SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate polyacrylamidegel electrophoresis,SDS-PAGE)检测目的蛋白的表达情况,优化表达条件,以较大体积培养基因工程菌,菌体经超声波破菌后,过Ni-NTA亲和柱纯化,Western-blot检测表达纯化的融合蛋白.结果 转化有pCold Ⅲ-CNN2重组质粒的基因工程菌能诱导表达CNN2蛋白,表达的目的蛋白占总菌体蛋白的35％；SDS-PAGE检测发现菌体上清液和沉淀物中均有目的蛋白片段,证实部分CNN2蛋白以可溶性形式表达；Western-blot检测结果提示表达纯化的蛋白能与抗CNN2抗体发生反应.结论 成功构建出表达可溶性CNN2蛋白的重组质粒,诱导表达的蛋白具有CNN2免疫原性.

关键词：肝肿瘤、CNN2、基因工程、表达、纯化

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分类号：R735.7(肿瘤学)

资助基金：国家自然科学基金资助项目81160362;广西自然科学基金资助项目2011GXNSFA018261;广西科学研究与技术开发计划项目桂科攻10124001A-2

在线出版日期：2013-03-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：311-315