小分子蛋白慢病毒表达系统的构建

摘要：

目的 构建趋化因子蛋白慢病毒表达系统,建立稳定表达GFP的卵巢癌细胞系,为研究趋化因子蛋白的功能及作用机制打下基础.方法 趋化因子CCL18、IL-8、CXCL1基因克隆质粒经PCR扩增、酶切,与慢病毒载体PWPI连接,构建的重组慢病毒质粒按比例与包膜质粒PCMV-dR 8.74及包装质粒PMD2.G混合,LipofectinTM2000共转染293T细胞系包装病毒颗粒,病毒液感染卵巢癌SKOV3细胞后,采用流式细胞仪分选出GFP表达的细胞作为转染成功的细胞.实时荧光定量PCR验证转染后目的基因的表达,Western blot验证目的蛋白的表达.结果 重组慢病毒基因能高效地转导入靶细胞,转导效率达95％以上,并稳定表达；实时荧光定量PCR检测结果显示:细胞和组织中转染目的基因组与对照组比较,均见目的基因的表达显著增高(P＜0.05)；Western blot验证转染目的基因组小分子蛋白成功表达.结论 本实验成功构建了小分子蛋白慢病毒表达系统,为进一步研究小分子蛋白在人体的功能及作用机制建立了实验基础.

关键词：慢病毒、小分子蛋白、卵巢癌

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分类号：R737.31(肿瘤学)

资助基金：国家自然科学基金资助项目30760266;广西自然科学基金资助项目0832230

在线出版日期：2012-04-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：271-276