干扰PRMT5表达肝癌细胞稳转细胞株的建立及鉴定

摘要：

目的 探讨干扰蛋白质精氨酸甲基转移酶5(PRMT5)表达肝癌细胞稳转细胞株的建立及鉴定.方法 针对PRMT5设计出该基因的有效短发夹RNA(shRNA)片段,选择合适慢病毒载体,通过基因工程技术,构建出PRMT5慢病毒载体介导的shRNA重组载体,并通过PCR以及测序检测构建序列的正确性.将重组病毒载体在病毒包装细胞中大量生产后,用病毒原液感染PRMT5表达量相对较高的SMMC-7721、BEL-7402细胞,2d后,用最低杀死浓度的嘌呤霉素进行筛选,得到克隆样生长的细胞,扩大培养后分别提取蛋白和RNA,Western印迹和qPCR检测PRMT5的表达.结果 成功构建出由人源性PRMT5慢病毒载体介导的shRNA重组载体pLKO.1-sh-PRMT5,PCR及测序均证明构建序列的正确.Western印迹法和qPCR检测,pLKO.1-sh-PRMT5干扰组的PRMT5蛋白及mRNA水平明显低于pLKO.1-sh-GFP组(P＜0.05),pLKO.1-sh-PRMT5载体具有良好的干扰效果.结论 运用慢病毒感染并筛选出稳转细胞株,在干扰效率及经济角度均优越于瞬时转染,为今后研究PRMT5在肝癌细胞中作用功能提供了良好的科研工具.

关键词：蛋白质精氨酸N-甲基转移酶、RNA、小分子干扰、慢病毒属、载体蛋白质类、蛋白质精氨酸甲基转移酶5

所属期刊栏目：9

分类号：TN9;R73

在线出版日期：2017-07-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：186-190