LDR-qPCR法检测miRNA122a的表达及其与乳腺癌雌激素调控的关系

摘要：

目的 建立一种新的基于连接酶依赖性反应的miR-122a实时定量PCR检测方法 (LDR-qPCR);研究乳腺癌细胞MCF-7中miR-122a的表达以及雌激素水平对其的影响.方法 以乳腺癌细胞MCF-7为样本、成熟的miR-122a为检测对象,将探针的连接反应和实时荧光定量PCR技术相结合,建立LDR-qPCR法,并开展方法 学评价以及不同(有或无激素)培养环境下miR-122a的表达分析.结果 LDR-qPCR法的扩增产物特异,经测序证实为miR-122a;LDR-qPCR法重复性好(cv<10%);检测下限为5 pg/μL总RNA,比茎环RT-qPCR法(50 pg/μL)敏感10倍.miR-122a在激素饥饿的MCF-7细胞中表达上调,约为常规培养细胞的3.65倍;经5 nmol/L雌二醇处理后又出现下调(P=0.040),但未回到常规培养细胞水平.结论 LDR-qPCR法特异、灵敏,检测范围宽;乳腺癌细胞MCF-7可表达miR-122a并受雌激素水平的调节.

关键词：荧光定量PCR、miR-122a、乳腺癌、雌激素

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分类号：O65;O21

资助基金：国家自然科学基金资助项目30840093;江苏省社会发展科技计划项目BS2007077

在线出版日期：2012-09-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：209-213