靶向RelA(p65)基因shRNA慢病毒载体构建及功能鉴定

摘要：

目的 构建靶向RelA(p65)基因的短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)慢病毒载体,并对其功能进行验证.方法 设计3 对针对RelA基因的RNA干扰序列,并合成相应的shRNA序列.shRNA退火形成双链oligo序列后应用基因重组技术构建重组质粒,经菌落聚合酶链式反应(PCR)及测序鉴定,将重组正确的质粒进行慢病毒包装和滴度测定,通过Western blot实验筛选出对HepG2 细胞株中RelA基因干扰效果最好的慢病毒,并通过CCK-8 检测Lenti-shRelA对细胞增殖活性的影响.结果 测序结果显示重组慢病毒载体与设计参考序列一致,提示重组慢病毒载体构建成功.重组慢病毒Y4056、Y21318、Y21319、Y21320 的滴度分别为3.13×108 TU/ml、2.97×108 TU/ml、2.51×108 TU/ml、3.40×108 TU/ml.用慢病毒Lenti-shRelA(Y21318、Y21319、Y21320、Y4056)感染HepG2 细胞,Western blot实验结果显示Y21320 对HepG2 细胞株中RelA基因的干扰效果最好.CCK-8 实验结果显示RelA的敲降可显著抑制细胞增殖活力.结论 该研究成功构建了靶向RelA基因shRNA慢病毒载体,其能有效下调HepG2 细胞RelA的表达并抑制细胞增殖,为进一步研究RelA在肝癌发生、发展中的机制奠定了基础.

关键词：RelA基因、短发夹RNA、慢病毒、肝癌

所属期刊栏目：16

分类号：R735.7(肿瘤学)

资助基金：北京市自然科学基金;首都卫生发展科研专项项目;北京市属医学科研院所公益发展改革试点项目

在线出版日期：2023-10-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：907-912