10.3881/j.issn.1000-503X.12913
右美托咪定介导Wnt通路对七氟醚诱导的新生大鼠认知功能障碍的影响
目的 探索右美托咪定(Dex)通过Wnt信号通路对七氟醚诱导的新生大鼠认知功能障碍的影响.方法 出生7 dSD大鼠60只,分成5组:正常对照组(不做任何干预处理)、Dex处理组(腹腔注射25 μg/kg的Dex)、七氟醚处理组(3％七氟醚处理4h)、七氟醚+Dex处理组(25 μg/kg Dex注射后3％七氟醚吸入4h)、七氟醚+Dex处理+Wnt抑制剂组(Wnt抑制剂XAV393及25 μg/kg Dex注射后3％七氟醚吸入4h).3周后Morris水迷宫检测大鼠认知功能;TdT介导的dUTP缺口末端标记实验(TUNEL)染色检测海马神经元细胞凋亡;神经核(NeuN)染色检测海马神经元存活;蛋白质免疫印迹检测凋亡相关蛋白表达;荧光定量PCR及蛋白质免疫印迹检测Wnt/糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)/β-链蛋白信号通路相关因子表达.结果 随着训练时间的延长,各组大鼠逃避潜伏期的时间逐渐缩短,与正常对照组相比,Dex处理组差异无统计学意义(t=0.304,P=0.768);七氟醚处理组(t=5.823,P=0.002)、七氟醚+Dex处理组(t=3.188,P=0.010)及七氟醚+Dex处理+Wnt抑制剂组(t=5.784,P=0.002)逃避潜伏期时间延长,差异有统计学意义.与七氟醚处理组相比,七氟醚+ Dex处理组(t=3.646,P=0.005)逃避潜伏期时间减少,差异有统计学意义.与七氟醚+ Dex处理组比较,七氟醚+Dex处理+Wnt抑制剂组(江3.296,P=0.008)逃避潜伏期时间增长,差异有统计学意义.各组穿越平台次数结果显示,与正常对照组相比,七氟醚处理组(t =5.179,P=0.004)、七氟醚+Dex处理组(t =2.309,P=0.043)及七氟醚+Dex处理+Wnt抑制剂组(t=3.871,P=0.003)穿越平台次数减少,差异有统计学意义;与七氟醚处理组比较,七氟醚+ Dex处理组(t=3.296,P=0.008)穿越平台次数增加;与七氟醚+Dex处理组比较,七氟醚+ Dex处理+Wnt抑制剂组(t=2.361,P=0.041)穿越平台次数较少.与正常对照组相比,Dex处理组凋亡细胞数差异无统计学意义(t=1.920,P=0.127),七氟醚处理组、七氟醚+Dex处理组及七氟醚+Dex处理+Wnt抑制剂组凋亡细胞数均有不同程度增加,其中七氟醚处理组增加16％(t=13.436,P=0.002),七氟醚+Dex处理组增加5％(t=7.752,P=0.001),七氟醚+Dex处理+Wnt抑制剂组增加11.5％(t=12.612,P=0.002).与七氟醚处理组相比,七氟醚+ Dex处理组细胞凋亡数降低11％(t=8.521,P=0.002),七氟醚+Dex处理+Wnt抑制剂组降低5.5％(t=3.123,P =0.036).与七氟醚+Dex处理组相比,七氟醚+Dex处理+Wnt抑制剂组细胞凋亡增加6.5％(t=6.250,P=0.003).在0.15 mm2区域内,与正常对照组相比,Dex处理组(t=0.898,P=0.136)及七氟醚+Dex处理组(t=0.203,P=1.519)阳性细胞数差异无统计学意义,七氟醚处理组及七氟醚+Dex处理+Wnt抑制剂组阳性细胞数均有不同程度减少,其中七氟醚处理组、七氟醚+ Dex处理+Wnt抑制剂组阳性细胞数分别减少31(t=4.702,P=0.009)及26个(t=3.948,P=0.014).与七氟醚处理组相比,七氟醚+Dex处理组阳性细胞数增加17个(t=3.415,P=0.018),七氟醚+Dex处理+Wnt抑制剂组增加5个(P=0.001).与七氟醚+Dex处理组相比,七氟醚+Dex处理+Wnt抑制剂组阳性细胞减少12个(t=3.010,P=0.039).蛋白质免疫印迹检测海马组织中凋亡相关蛋白半胱氨酸蛋白酶3、Bax、Bcl-2的灰度值,结果显示与正常对照组相比,Dex处理组差异无统计学意义(=0.612,P=0.573;t=1.225,P=0.288;t=0.961,P =0.391),七氟醚处理组、七氟醚+Dex处理组及七氟醚+Dex处理+Wnt抑制剂组Bax(t=13.440,P=0.002;t=8.520,P=0.001;t=13.320,P=0.002)及半胱氨酸蛋白酶3(t=9.860,P=0.001;t=6.120,P=0.004;t=11.620,P =0.003)均表达上调,Bcl-2(t=7.671,P=0.002;=2.880,P=0.045;t=6.280,P=0.003)表达下调.与七氟醚处理组相比,七氟醚+ Dex处理组Bax(t=8.130,P=0.001)及半胱氨酸蛋白酶3(=7.120,P=0.002)均表达下调,Bcl-2(t=6.201,P=0.003)表达上调.与七氟醚+Dex处理组相比,七氟醚+Dex处理+Wnt抑制剂组Bax(t=7.310,P =0.002)及半胱氨酸蛋白酶3(t=7.750,P=0.002)均表达上调,Bcl-2(t=4.206,P=0.013)表达下调.荧光定量PCR检测海马组织Wnt/β-链蛋白信号通路相关分子Wnt3a、GSK-3β、β-链蛋白mRNA的表达情况显示,与正常对照组相比,Dex处理组Wnt3a、GSK-3β及β-链蛋白(t=1.230,P=0.290;t=0.901,P=0.418;t=1.837,P=0.140)及七氟醚+ Dex处理组Wnt3a、β-链蛋白(t=1.102,P=0.332;t=1.030,P=0.361)表达差异均无统计学意义,七氟醚处理组(t =5.790,P=0.004;t=7.130,P=0.002)、七氟醚+Dex处理+Wnt抑制剂组(t=7.130,P=0.002;t=5.500,P=0.005)中Wnt3a、β-链蛋白表达均下调,七氟醚处理组(t=4.800,P=0.009)、七氟醚+Dex处理组(t=2.940,P =0.045)及七氟醚+Dex处理+Wnt抑制剂组(t=3.100,P=0.042) GSK-3β表达上调.与七氟醚处理组相比,七氟醚+ Dex处理组Wnt3a(t=4.460,P=0.011)及β-链蛋白(t=6.390,P=0.003)均表达上调,GSK-3β(t=4.160,P=0.004)表达下调.与七氟醚+Dex处理组相比,七氟醚+Dex处理+Wnt抑制剂组Wnt3a(t=5.730,P=0.005)及β-链蛋白(t=4.640,P=0.0I0)均表达下调,GSK-3β有表达上调趋势,但差异无统计学意义(t=3.240,P=0.117).与正常对照组相比,Dex处理组(t=0.735,P=0.503;=0.245,P=0.819)及七氟醚+Dex处理组(t=1.623,P=0.180;t=1.159,P=0.311) Wnt3a、β-链蛋白表达差异均无统计学意义,七氟醚处理组(t=7.280,P=0.002;t=5.640,P=0.005)与七氟醚+Dex处理+Wnt抑制剂组(t=7.240,P=0.002;t=4.970,P=0.008)表达下调.与七氟醚处理组相比,七氟醚+ Dex处理组Wnt3a(t=6.410,P=0.003)、β-链蛋白表达上调(t=4.640,P=0.015).与七氟醚+Dex处理组相比,七氟醚+ Dex处理+Wnt抑制剂组Wnt3a(t=6.360,P=0.003)、β-链蛋白(t=4.640,P=0.016)表达下调.蛋白质免疫印迹检测P (ser9)-GSK-3β/GSK-3β蛋白灰度值,结果显示与正常对照组相比,七氟醚处理组(t=11.280,P=0.002)、七氟醚+Dex处理组(t=7.080,P=0.002)及七氟醚+Dex处理+Wnt抑制剂组(t=9.970,P=0.001)P(ser9)-GSK-3β/GSK-3β表达均下调.与七氟醚处理组相比,七氟醚+Dex处理组P(ser9)-GSK-3β/GSK-3β表达均上调(t =8.310,P＜0.001).与七氟醚+Dex处理组相比,七氟醚+Dex处理+Wnt抑制剂组P(serg)-GSK-3β/GSK-3β表达下调(=5.510,P=0.005).结论 Dex可介导Wnt/GSK-3β/β-链蛋白信号通路,抑制七氟醚诱导的新生大鼠认知功能障碍.
右美托咪定、七氟醚、认知功能障碍、Wnt信号通路
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R614(外科手术学)
2021-05-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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