扬子鳄胃蛋白酶原C基因克隆、序列分析及其表达

摘要：

目的 探讨扬子鳄胃蛋白酶原C (PGC)基因的分子克隆和结构特征,研究其系统进化关系和组织定位表达,分析成年扬子鳄在不同生命活动时期胃黏膜组织中PGC基因表达的变化规律.方法 采用反转录PCR和cDNA末端快速扩增技术,从扬子鳄胃黏膜中克隆PGC基因cDNA全长序列;利用生物信息学方法和工具预测其蛋白的理化参数和高级结构;通过Clustal X软件对扬子鳄和其他脊椎动物PGC氨基酸序列进行序列比对,使用MEGA6软件构建系统进化邻接树;应用免疫组织化学法对扬子鳄胃黏膜组织中PGC进行组织定位;用实时定量PCR法检测PGC mRNA在不同生命活动时期胃黏膜组织中的表达水平.结果 从扬子鳄胃黏膜中克隆并获得扬子鳄PGC基因cDNA序列,该序列全长1568 bp,其中开放阅读框1167 bp,编码388个氨基酸;递交GenBank数据库,获得登录号为KY799383.扬子鳄PGC蛋白相对分子质量为41 998,理论等电点为4.16.同源建模法预测该蛋白具有2个天冬氨酸催化活性位点及6个必需半胱氨酸残基位点.系统进化关系表明,扬子鳄PGC氨基酸序列与密河鳄紧密聚为一支,然后与其他鳄类聚在一起.扬子鳄PGC特异性地表达于胃黏膜组织,且繁殖期与冬眠期表达差异有统计学意义(P＜0.05).结论 扬子鳄PGC基因具有高度保守性,其蛋白是胃特有的一种具有消化功能的天冬氨酸蛋白酶.

关键词：扬子鳄、胃蛋白酶原、基因克隆、序列分析、基因表达

所属期刊栏目：40

分类号：Q955(动物学)

在线出版日期：2018-06-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共10页

页码：201-210