基于微小RNA架构的新型随机短发夹RNA文库构建

摘要：

目的 构建高效发夹状随机短发夹RNA (shRNA)文库.方法 构建由polⅡ启动子(CMV)驱动的增强绿色荧光蛋白(EGFP)下游连接shRNA的表达载体,转染细胞后收取蛋白,用Western blot和荧光素酶报告基因系统检测该载体表达的shRNA对靶基因表达的抑制效率.在由CMV启动的EGFP下游连接shRNA的表达载体基础上,构建EGFP下游连接基于微小RNA (miRNA)架构的shRNA表达载体,转染细胞后收取RNA,用实时定量荧光PCR法检测该载体表达的shRNA对靶基因表达的抑制效果.基于EGFP下游连接基于miRNA架构的shRNA表达载体实时定量荧光PCR的检测结果,构建基于miRNA架构的大容量随机shRNA文库.结果 由polⅡ启动子(CMV)驱动发夹状shRNA转录时,shRNA要位于一个大的转录本之后才能被有效转录.基于miRNA架构环境可提高shRNA的干扰效率.构建了一个容量为1.8×107的基于miRNA架构的大容量随机shRNA文库.结论 构建了一个大容量的新型随机shRNA文库.

关键词：微小RNA、短发夹RNA、随机文库

所属期刊栏目：39

分类号：Q74(生物小分子的结构和功能)

资助基金：国家自然科学基金31050008、 31470067Supported by the National Natural Sciences Foundation of China 31050008,31470067

在线出版日期：2017-11-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：518-524