绿色荧光蛋白转基因大鼠骨髓间充质干细胞培养及鉴定

摘要：

目的 体外分离、培养和鉴定增强型绿色荧光蛋白(EGFP)转基因大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs).方法 取EGFP转基因大鼠胫、股骨骨髓,全骨髓贴壁法分离培养、纯化BMSCs;荧光显微镜观察细胞形态;流式细胞仪分析细胞表型;CCK-8法绘制细胞生长曲线并与野生型BMSCs增殖情况相比较;分别向成脂、成骨、成软骨诱导分化鉴定;将细胞经鼠尾静脉移植入大鼠体内,观察其在体内定植情况.结果 获得稳定表达EGFP的BMSCs,以长梭形为主,融合后呈漩涡状排列;生长曲线示EGFP-BMSCs增殖能力旺盛,与野生型BMSCs相比差异无统计学意义(t=-0.023,P=0.982);细胞CD29、CD90、CD34、CD49d、CD45表达率分别为99.4％、96.4％、0.171％、0.049％、0.038％;成脂、成骨、成软骨诱导后,分别给予油红O、茜素红、甲苯胺蓝染色,结果均呈阳性;在肺组织内可检测到稳定的绿色荧光.结论 成功获得高纯度、稳定表达EGFP的BMSCs,干细胞特性不受EGFP影响.细胞定植后,示踪效果良好,可用于后续实验研究.

关键词：骨髓间充质干细胞、绿色荧光蛋白、诱导分化

所属期刊栏目：38

分类号：R394.2

资助基金：国家自然科学基金81370739;江苏省自然科学基金BK20131303 Supported by the National Natural Sciences Foundation of China81370739;the Natural Science Foundation of Jiangsu ProvinceBK20131303

在线出版日期：2016-06-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：9-15