Accutase和胰蛋白酶消化传代对人胚纹状体来源神经干细胞凋亡的影响

摘要：

目的 探讨Accutase和胰蛋白酶消化神经干细胞(NSCs)后对其凋亡过程的影响.方法 来自人类12 ～ 16周自然流产胚胎纹状体组织,分离并体外培养NSCs,将体外培养的第3～5代神经球,分别用胰蛋白酶、Accutase消化,消化过程中仅振荡打散,避免巴斯德吸管反复吹打.将神经球打散成的单细胞悬液接种.用Annexin V/碘化丙啶染色、Hoechst 33342活细胞染色镜下观察等方法,在培养传代后2和24h时间点检测神经干细胞凋亡率.结果 两种酶消化后立即用台盼蓝染色判断细胞活性,Accutase消化后活细胞比例为(91.65±4.43)％,胰蛋白酶仅有(83.10 ±6.76)％,二者比较差异有统计学意义(P＜0.05).体外培养的第3～5代人胚纹状体NSCs形成的神经球传代后2h,Accutase和胰蛋白酶传代的细胞凋亡率差异有统计学意义(P＜0.01),而到24 h时间点,Accutase消化的细胞凋亡率经Annexin V/碘化丙啶、Hoechst 33342活细胞染色两种方法检测已经达到50％,而胰蛋白酶消化后的细胞凋亡率在此时间点维持在l5％～20％.Accutase消化后的NSCs生长4d后,克隆形成率和神经球直径分别为(7.83±1.32)％和(43.5±9.76) μm,均显著低于胰蛋白酶传代组的(19.22±3.66)％和(58.4±18.73) μm (P＜0.01).结论 虽然台盼蓝染色显示Accutase消化神经球后的细胞存活比胰蛋白酶更多,但消化后24 h内,Accutase消化的细胞凋亡率显著升高,最终神经球新克隆形成率低,直径更小.胰蛋白酶消化振荡打散神经球后的凋亡率较Accutase具有明显优势;神经球消化后台盼蓝即时染色的结果不足以预示后期NSCs凋亡率.

关键词：神经干细胞、神经球、Accutase、胰蛋白酶、凋亡

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分类号：R392.2+8

资助基金：国家自然科学基金青年基金81100057;长治医学院创新团队项目CX201408 Supported by the National Natural Sciences Youth Foundation of China81100057;Changzhi Medical College Innovation Team ProjectCX201408

在线出版日期：2015-06-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共10页

页码：185-194