稳定表达人血红素加氧酶-1细胞系的建立及其功能鉴定

摘要：

目的 构建稳定表达人血红素加氧酶-1 (HO-1)的细胞系,探讨内源性过表达HO-1对抗细胞氧化损伤的作用.方法 PCR扩增HO-1基因并将其克隆至改造的慢病毒载体pLentiLox3.7中,构建携带目的基因的重组质粒.用重组质粒转染HEK293T细胞,并用Western blot检测H0-1的表达.将重组质粒与慢病毒辅助质粒(plp1、plp2、VSVG)共同转染HEK293T细胞,包装有活力的慢病毒.用携带H0-1的慢病毒感染HEK293T细胞,筛选出能稳定表达目的基因的单克隆,并行Western blot检测H0-1的表达.将过氧化氢加入正常的及过表达H0-1的HEK293T细胞和人脐静脉内皮细胞,检测细胞内活性氧的含量.结果 成功筛选出能稳定表达H0-1的单克隆细胞系并扩大培养,Western blot检测其H0-1的表达明显升高.加入过氧化氢后,过表达H0-1的HEK293T细胞和人脐静脉内皮细胞内的活性氧明显减少.结论 成功构建了能稳定表达人H0-1的细胞系,内源性过表达H0-1能够对抗细胞的氧化损伤.

关键词：血红素加氧酶-1、慢病毒、稳定细胞株、氧化损伤

所属期刊栏目：36

分类号：R34(人体生物化学、分子生物学)

资助基金：北京市自然科学基金7122145 Supported by the Beijing Natural Sciences Foundation 7122145

在线出版日期：2014-10-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：420-425