含末端半胱氨酸人类表皮生长因子受体2亲和体的重组表达与亲和纯化

摘要：

目的 通过基因重组表达制备一种氨基端带有HEHEHE序列,羧基端带有GGGC序列的ZHER2∶V2亲和体,为无创的人类表皮生长因子受体2 (HER2)显像创造条件.方法 采用基因设计软件,将HER2亲和体编码基因的密码子进行优化,使之适合于大肠杆菌重组表达.在HER2亲和体的氨基端增加HEHEHE氨基酸序列,羧基端增加GGGC氨基酸序列.采用HindⅢ酶切鉴定合成基因长度,基因测序证实合成的基因序列.将HER2亲和体基因克隆入pET22b(+)质粒,转化感受态BL21 (DE3)大肠杆菌.IPTG诱导重组表达菌后用SDS-PAGE分析鉴定表达产物的相对分子质量.镍柱亲和结合、咪唑洗脱纯化蛋白质.同位素68Ga标记亲和体后通过饱和分析测定HER2阳性细胞MDAMB-361的亲和力.结果 HindⅢ酶切和基因测序证实,合成的HER2亲和体基因序列5’端含有HEHEHE的基因编码序列,3’端含有GGGC的基因编码序列.经过基因克隆、转化和IPTG诱导,发现重组大肠杆菌新表达相对分子质量约8×103的蛋白质.重组表达蛋白质经镍柱亲和结合后,经60 mmol/L咪唑洗脱得以纯化.亲和体经68Ga标记后和HER2阳性细胞MDA-MB-361的亲和力Kd值为1.5 nmol/L.结论 获得一种氨基端带有HEHEHE序列,羧基端带有GGGC序列的ZHER2∶V2亲和体.

关键词：人类表皮生长因子受体2、亲和体、表达、纯化

所属期刊栏目：35

分类号：Q816(生物工程学(生物技术))

在线出版日期：2013-10-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：281-285