含临床病毒株聚合酶逆转录酶区的乙肝病毒DNA稳定复制细胞系的构建

摘要：

目的 构建含有临床病毒株聚合酶逆转录酶(RT)区的乙肝病毒(HBV) DNA稳定复制细胞系.方法 采用巢式PCR从患者血清扩增HBV DNA片段,利用片段置换反应将该片段克隆到HBV DNA复制载体,并在该载体上引入新霉素抗性基因,在确认该重组DNA体外可复制后,将其转染HepG2细胞,G418筛选,采用real-time PCR结合ELISA及Southern blot检测初筛和鉴定HBV DNA稳定复制细胞系.结果 从患者血清扩增出的HBV DNA片段nt55～1654被成功置换到HBV复制质粒pLL相应区域,得到质粒p11;新霉素抗性基因表达片段被克隆到p11中HBV DNA下游,获得质粒p11-neo,Southern blot检测证实p11-neo可支持体外复制；p11-neo转染HepG2后,经筛选鉴定,获得了可支持HBV DNA稳定复制的细胞系3-10.结论 建立了含有临床病毒株聚合酶RT区的HBV DNA稳定复制细胞系,real-time PCR结合ELISA有助于HBV DNA稳定复制细胞系的快速初筛鉴定.

关键词：乙型肝炎病毒、逆转录聚合酶、复制、稳定细胞系

所属期刊栏目：35

分类号：R512.6+2(传染病)

资助基金：国家自然科学基金81000732;重庆市自然科学基金cstc2011jjA10005

在线出版日期：2013-05-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：13-18