靶向敲减Ras癌蛋白融合型泛素连接酶E3的构建

摘要：

目的 应用蛋白质敲减技术原理,构建理论上能够靶向敲减Ras癌蛋白的融合型泛素连接酶E3的真核表达载体.方法 选取Raf-1、PI3K、RalGDS中能够与Ras蛋白相互作用的结合结构域和具有泛素连接酶活性的F-Box及U-Box作为功能结构域,采用分子克隆技术依次将其连入pcDNA3.1中构建融合蛋白表达载体,双酶切、PCR和测序技术检测连入核苷酸片段的正确性,Western blot检测融合蛋白表达载体在真核细胞内表达的正确性和作用有效性.结果 成功获得6个融合蛋白E3表达载体,5个能够在真核细胞内有效表达,其中(RBD+ CRD) Raf-1 -U-Box-pcDNA3.1能够敲减人胰腺癌细胞系PANC-1细胞中Ras蛋白.结论 成功构建能够靶向敲减Ras癌蛋白的融合蛋白表达载体,为下一步应用蛋白质敲减技术奠定了实验基础.

关键词：泛素、蛋白酶体、泛素连接酶、Ras癌蛋白

所属期刊栏目：34

分类号：R446.8(诊断学)

资助基金：国家自然科学基金30270599、3047197、30973470、81172334;卫生部卫生行业科研专项项目200802011;教育部高等学校博士学科点专项科研基金20060023013

在线出版日期：2012-11-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：313-318