非病毒诱导体系高效诱导脐带来源间充质干细胞向胰岛细胞分化

摘要：

目的 探讨非病毒法诱导脐带来源间充质干细胞(UC-MSC)向胰岛素分泌细胞分化的可行性,为胰岛细胞移植治疗糖尿病提供临床移植数量级的细胞.方法 从人脐带分离间充质于细胞,体外分阶段诱导分化为胰岛细胞.采用RT-PCR方法比较胰岛细胞分化过程中转录因子foxa2、sox17、pdx1、ngn3、pax4、insulin和glut-2在诱导组和非诱导组中的表达水平；免疫荧光染色方法检测胰岛素和C-肽在诱导终末阶段细胞中的表达定位；酶联免疫吸附实验(ELISA)检测胰岛素及C-肽的分泌以及细胞对葡萄糖刺激的反应性.结果 诱导第1阶段末,诱导后细胞foxa2和sox17的表达明显高于未诱导细胞(P均＜0.05)；诱导第2阶段末,诱导细胞pdx1、ngn3和pax4的表达明显高于未诱导细胞(P均＜0.05)；诱导第3阶段末,诱导细胞的insulin和glut-2表达明显高于未诱导细胞(P均＜0.05).免疫荧光染色结果显示,胰岛素和C-肽均表达于诱导终末分化阶段的细胞,效率可达90％以上.ELISA检测结果显示,诱导第3阶段末细胞胰岛素总量为(346.3 739±32.5 149)μU/ml,明显高于未诱导细胞的(17.69±1.46)μU/ml(P＜0.01)；诱导后细胞置于5.5 mmol/L葡萄糖环境检测到的基础C-肽释放量为(195.10±8.88)pmol/L/h(P＜0.01),细胞置于22 mmol/L葡萄糖环境测定葡萄糖刺激C-肽释放量达到(340.99 ±7.91)pmol/L/h(P＜0.01).结论 以UC-MSC作为种子细胞,采用体外非病毒诱导体系获得的分化终末阶段细胞是具有胰岛素分泌功能的成熟胰岛细胞.

关键词：脐带、间充质干细胞、胰岛细胞、转录因子

所属期刊栏目：33

分类号：Q291

资助基金：国家重大科学研究计划项目2011CB964901

在线出版日期：2012-04-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：675-678