非洲爪蟾驱动蛋白样蛋白2靶蛋白C'末端SBP-3×Flag标记的HCT116结直肠癌细胞模型的建立

摘要：

目的 建立非洲爪蟾驱动蛋白样蛋白2靶蛋白(TPX2)C'末端SBP-3×Flag标记的HCT 116结直肠癌细胞模型.方法 PCR扩增同源臂,构建TPX2的腺相关病毒打靶载体,包装病毒后打靶HCT 116结直肠癌细胞,G418和PCR筛选获得含有新霉素抗性基因的阳性细胞株,最后通过Cre病毒感染去除抗性基因,并用PCR方法筛选获得TPX2C'末端SBP和3×Flag内源性双标签的HCT 116结直肠癌细胞株.结果 筛选获得2个含有新霉素抗性基因的细胞株,随后经Cre病毒感染得到去除新霉素抗性基因的阳性细胞克隆,并经Western blot检测验证了SBP-3×Flag基因的敲入.结论 成功建立了TPX2 C'末端SBP-3×Flag标记的HCT 116结直肠癌细胞模型.

关键词：非洲爪蟾驱动蛋白样蛋白2靶蛋白、基因敲入、同源重组、HCT 116、结直肠癌

所属期刊栏目：33

分类号：R735.3+4(肿瘤学)

资助基金：国家重大研究计划项目2011CB944302、2011CB944404;国家重点实验室专项基金2060204;湖北省自然科学基金2010CDB08704

在线出版日期：2012-04-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：624-628