神经元抑制性沉默元件双链RNA慢病毒载体的构建与鉴定

摘要：

目的 构建神经元抑制性沉默元件(RE-1/NRSE)双链RNA的慢病毒载体.方法 根据RE-1/NRSE序列合成靶序列的寡核苷酸序列,退火形成双链DNA,与经HpaⅠ和XhoⅠ双酶切后的pGC-LV载体连接产生L-smRE-1/NRSE慢病毒载体,采用PCR和测序对阳性克隆进行鉴定.用L-smRE-1/NRSE和包装质粒pHelper 1.0、pHelper2.0共转染293T细胞,包装产生慢病毒颗粒,在倒置荧光显微镜下观察293T细胞中绿色荧光蛋白的表达量,并计算病毒滴度,初步观察其对大鼠间充质干细胞的转染效率.结果 PCR和测序证实,构建出了RE-1/NRSE双链RNA的慢病毒载体L-smNRSE/RE-1.包装慢病毒,浓缩病毒悬液的滴度为4×10~8 TU/ml.慢病毒颗粒能稳定转染大鼠间充质干细胞,当感染复数为80时,感染效率达100%.结论 成功构建了RE-1/NRSE dsRNA的慢病毒表达载体.

关键词：神经元抑制性沉默元件、双链RNA、慢病毒载体

所属期刊栏目：31

分类号：R246.6(中医临床学)

资助基金：辽宁省自然科学基金20062090;辽宁省教育厅科学技术研究项目2004d227

在线出版日期：2010-03-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：760-764,799