腾冲嗜热厌氧菌新型变旋酶的表达、纯化及晶体分析

摘要：

目的 纯化腾冲嗜热厌氧菌新型变旋酶TTE1925,用于晶体生长和三维结构分析.方法 将tte 1925基因克隆至原核表达载体pGEX-6P-1中,将菌落PCR和测序鉴定正确的重组质粒转化E. coli BL 21(DE 3)后获得表达菌株.该菌株经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导高效表达出带有谷胱甘肽S转移酶标签的可溶性融合蛋白,经过Glutathione Sepharose~(TM)4B亲和层析、Resource Q 6mL离子交换层析和10/300 superdex 200分子筛层析纯化后,得到目的 蛋白TTE1925.结果 纯化后蛋白的纯度达到99%以上.蛋白采用悬滴气相扩散法得到衍射至1.9(A)的棒状晶体.结论 成功制备了高纯度TTE1925蛋白,获得TTE1925蛋白质晶体,为进一步解析变旋酶的三维结构及其生物学功能分子机制研究奠定了基础.

关键词：腾冲菌、TTE1925、半乳糖变旋酶、原核表达、蛋白质纯化、结晶

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分类号：Q786(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家重点基础研究发展计划项目973计划2006CB504001;973重大研究计划项目2006CB944002

在线出版日期：2010-03-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：696-701