抗抗CD3 ScFv单克隆抗体的制备和活性检测

摘要：

目的 制备抗抗CD3 ScFv单克隆抗体,用以抗CD3抗体的亲和层析纯化及血清中该类抗体浓度的检测.方法 采用常规免疫学方法 制备抗抗CD3 ScFv单克隆体并制备抗抗CD3 ScFv单克隆抗体免疫亲和层析柱,用于抗CD3 ScFv蛋白和去除E-tag的Diabody [CD3×Pgp]的分离纯化.采用FACS法测定分别经抗抗CD3 ScFV抗体免疫亲和层析柱及抗E-tag亲和层析柱纯化的抗CD3 ScFv蛋白和Diabody [CD3×Pgp]对K562/A02和Jurkat细胞特异结合活性.采用间接ELISA法进行抗抗CD3 ScFv抗体特异性结合活性的检测 .结果 抗抗CD3 ScFV单克隆抗体能特异性地与抗CD3 ScFv蛋白结合而不与血清发生反应.经抗抗CD3 ScFV抗体免疫亲和层析柱和经抗E-tag亲和层析柱纯化后的抗CD3 ScFv蛋白均能与Jurkat细胞特异结合.经抗抗CD3 ScFV抗体免疫亲和层析柱纯化的去除E-tag的Diabody [CD3×Pgp]与K562/A02和Jurkat细胞结合的阳性率分别为89.87%和83.95%;与其亲代抗体竞争结合K562/A02和Jurkat细胞后,结合率分别下降为56.30%和43.78%.结论 制备了抗抗CD3单克隆抗体和亲和层析柱,可用于抗CD3抗体的亲和层析纯化及血清中该类抗体浓度的检测.

关键词：抗CD3ScFv蛋白、单克隆抗体、免疫亲和层析、Diabody[CD3×Pgp]

所属期刊栏目：30

分类号：R392.33

资助基金：国家自然科学基金30400558;天津科技发展计划项目05YFGX02800

在线出版日期：2008-10-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：354-359