CD40L融合改造后的人乳头瘤病毒16型E7基因DNA疫苗的构建及其免疫原性测定
目的 研究针对人乳头瘤病毒(HPV)16型的DNA疫苗,测定其免疫原性,用于治疗HPV16感染及感染相关恶性肿瘤.方法 联合采用基因切割重排、定点突变及密码子优化等策略改造HPV16的转化基因E7,基因合成法获得改造后的E7基因(mE7);PCR法将mE7基因与CD40L胞外区编码序列融合,然后以pVR1012为载体构建pVR1012-mE7(mE7)及pVR1012-mE7/CD40L(mE7/CD40L)表达质粒;经肌肉免疫C57BL/6小鼠;ELISA法检测E7特异性血清抗体水平,ELISPOT法分析E749-57(H-2b)特异性分泌IFN-γ的CD8+T细胞活化水平,胞内染色-流式细胞检测分析E7特异性CD4+ Th细胞活化水平;并在C57BL/6小鼠体内进行疫苗抗瘤活性检测.结果 与野生型E7基因(wE7)相比,mE7基因诱发产生的E7特异抗体水平(P＜0.01)、分泌IFN-γ的CD8+T细胞数目(P＜0.01)及CD4+ Th细胞活化水平(P＜0.05)均显著提高;与mE7基因相比,mE7/CD40L融合基因可进一步显著提高E7特异性分泌IFN-γ的CD8+T细胞数目(P＜0.01),但对E7特异性抗体产生及CD4+ Th细胞活化水平没有明显影响.疫苗小鼠体内预防性免疫实验中,经wE7免疫的小鼠接种瘤细胞后2周内全部形成移植瘤,而所有经mE7及mE7/CD40L免疫的小鼠在瘤细胞攻击后第7周仍未见移植瘤形成;疫苗体内治疗性免疫实验中,小鼠在接种wE7后第8天左右全部形成移植瘤,并呈渐进性生长,而接种mE7的小鼠移植瘤清除率为30%,接种mE7/CD40L的小鼠移植瘤清除率增高至45%.对移植瘤的组织学检查结果显示,mE7/CD40L及mE7免疫组小鼠瘤细胞间及瘤组织周围可见大量淋巴细胞浸润,而wE7组小鼠的瘤细胞呈编织状紧密排列,未见有淋巴细胞浸润.结论 HPV16型mE7/CD40L融合基因疫苗免疫小鼠后可诱发较强的E7特异性细胞免疫及体内抗瘤活性,具有较强的免疫原性.
人乳头瘤病毒、子宫颈癌、DNA疫苗、CD40配体
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R772.2;Q786(眼科学)
国家自然科学基金30472022
2007-12-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共9页
584-591,Ⅱ
