阿尔茨海默病Aβ人抗体可变区片段基因的克隆和表达
目的筛选出β淀粉样蛋白40(Aβ40)的人源抗体单链可变区片段,克隆单链抗体的基因并在原核生物大肠杆菌表达,为阿尔茨海默病的诊断和治疗开辟新的途径.方法先将Aβ40包被在免疫反应板上,后用来自正常人外周血淋巴细胞的单链抗体文库结合.经过5轮的生物淘金法筛选,从最后一轮噬菌体感染的大肠杆菌TG1中随机挑选55个克隆进行ELISA测试,筛选出Aβ40特异的单链抗体并对其进行基因测序.将人源抗体单链可变区片段基因克隆到原核表达载体pGEX-6P-1上,转化大肠杆菌BL21表达谷胱甘肽-S-转移酶(GST)融合的单链抗体.结果ELISA测试表明,55个克隆中有33个克隆能结合Aβ40,Aβ40对10个克隆的竞争抑制率达到50%以上,而其中5个克隆的抗原结合表位在Aβ40的氮基端1~16个氨基酸之间.DNA测序结果发现,Aβ40单链抗体基因由768 bp组成,推导得到的氨基酸序列具有典型的抗体可变区结构.将单链抗体基因克隆到原核表达系统中诱导表达,得到相对分子质量为55 000的GST融合抗体表达产物.结论利用非免疫途径筛选出阿尔茨海默病发病中起关键神经元毒性作用的Aβ40的人源抗体单链可变区片段,为该抗体的表达和临床应用打下了基础.
阿尔茨海默病、Aβ、单链抗体
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R743.1(神经病学与精神病学)
2003-12-26(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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557-562