6A8α-甘露糖苷酶酶解p-nitrophenyl-α-D-mannopyranoside

摘要：

目的明确6A8 cDNA编码蛋白质的α-甘露糖苷酶性质.方法利用基因重组技术将克隆到的3个DNA片段拼接成完整6A8 cDNA,将其插入到真核表达载体pCDI,转染COS-7细胞,用酶活性检测与Western blot对瞬时表达的蛋白质的性质进行鉴定.结果拼接后的cDNA片段经测序完全符合6A8 cDNA碱基顺序.转染重组表达载体pCDI-6A8的COS-7细胞的匀浆对p-nitrophenyl-α-D-mannopyranoside的酶解作用为转染空载体pCDI的细胞及野生型细胞的3～4倍,且这种酶解作用不能被swainsonine所抑制.Western blot检测显示在相对分子质量(Mr)120 000处有一明显蛋白带,此带的显影于转染pCDI-6A8 cDNA的细胞明显深于转染空载pCDI及野生型细胞.结论6A8 cDNA编码的蛋白质确为一种α-甘露糖苷酶,属于Ⅱ类α-甘露糖苷酶.

关键词：6A8、α-甘露糖苷酶、COS-7细胞、瞬时表达

所属期刊栏目：23

分类号：R392.11

资助基金：国家自然科学基金39630300

在线出版日期：2004-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：423-427