应用简并引物RT-PCR扩增锌指结构域筛选新基因

摘要：

目的应用简并引物RT-PCR扩增并克隆TF-ⅢA型锌指蛋白基因表达序列标签(EST),以最终获得新的锌指蛋白基因.方法分别用TPA和Hemin诱导人红白血病(HEL)细胞,提取总RNA.根据Ⅱ-ⅢA型锌指蛋白保守序列设计简并引物,并以之进行RT-PCR扩增,然后将其克隆到pGEM-T easy载体中测序,应用DNAsis软件分析序列并通过GenBank blast进行序列比较.结果克隆并测序了30个扩增片段,22个是锌指蛋白基因的EST,其中17个是新的锌指蛋白基因EST.结论应用简并引物RT-PCR克隆一些具有保守氨基酸顺序结构域的蛋白基因EST是可行的,并具有简便、高效等优点.此外,还可有目的地克隆一些具有重要功能结构域的蛋白质基因.

关键词：锌指蛋白、简并引物、RT-PCR、基因克隆、造血细胞分化

所属期刊栏目：23

分类号：Q784(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家自然科学基金39893320;高等学校博士学科点专项科研项目200001

在线出版日期：2004-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：281-284