钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ的制备与活性测定

摘要：

目的从牛心肌中提取纯化钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ),并测定其活性.方法采用DEAEcellulose柱层析和Sepharose 4B亲和层析分离纯化蛋白,用γ-32P掺入法测定CaMKⅡ及自磷酸化的CaMKⅡ活性.结果从牛心肌中提取到钙调蛋白结合的蛋白组分,纯化后得到的CaMKⅡ比较稳定,产量也较高.此过程比较简单,适合大量制备.经SDS-PAGE检测,发现酶提取物均质,酶亚基的目的蛋白带相对分子质量为56 000.在syntide-2为底物的反应中,纯化的CaMKⅡ的特异性酶活性为7.84 pmol@[e-mail]Ⅱ可自磷酸化,经过自磷酸化的酶在Ca2+和钙调蛋白不存在时也保持活性.结论通过凝胶层析与亲和层析可提纯CaMKⅡ.

关键词：钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ、层析、活性测定

所属期刊栏目：23

分类号：R96(药理学)

资助基金：国家自然科学基金39770852

在线出版日期：2004-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：228-231