野生型犬尿氨酸酶表达载体的构建及酶活性检测
目的 构建野生型犬尿氨酸酶(KYNU)的真核表达载体,并分析其在HEK293细胞中的表达及其酶活性.方法 抽提人肝脏细胞的总RNA,通过反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法获得KYNU基因全长cD-NA,将野生型KYNU基因克隆到pcDNA载体质粒中,获得野生型pcDNA-KYNU重组表达质粒,经酶切鉴定和测序验证后转染HEK293细胞,用蛋白质印迹法技术检测野生型KYNU在细胞中的表达,用高效液相色谱法(HPLC)检测HEK293细胞表达的野生型KYNU酶蛋白的活性.结果 通过测序及酶切鉴定野生型pcDNA-KYNU重组表达质粒扩增后的PCR产物电泳结果显示构建成功,蛋白质印迹法结果显示转染有重组野生型cDNA-KYNU质粒的HEK293细胞能表达KYNU蛋白,HPLC结果显示野生型KYNU酶存在活性.结论 成功构建野生型pcDNA-KYNU的真核表达载体,野生型重组质粒在HEK293细胞中能够表达KYNU并具有一定的酶活性.
犬尿氨酸酶、野生型、高血压、高效液相色谱法
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R39;S85
国家自然科学基金30270545;浙江省教育厅科研项目Y201017610;浙江省中医药普通项目2009CB048
2017-05-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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