短发夹RNA沉默YAP表达对肝癌细胞SMMC-7721增殖和凋亡的影响
目的 本实验通过短发夹RNA(shRNA)抑制Yes相关蛋白(YAP)基因的表达,并观察其对肝癌细胞SMMC-7721的增殖、凋亡和周期影响.方法 以 人YAP mRNA编码区中的4条序列作为RNA干扰靶点,分别构建4个真核表达载体质粒YAP-shRNA-1、YAP-shRNA-2、YAP-shRNA-3、YAP-shRNA-4,用阳离子聚合物转染法瞬时转染,筛选出2个干扰效果较好的质粒,将它们瞬时转染肝癌细胞SMMC-7721,应用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)和蛋白印迹法检测SMMC-7721细胞中YAP在mRNA和蛋白水平表达的变化.噻唑蓝(MTT)法检测转染后细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡和周期的变化.结果 转染后293T细胞中shRNA-YAP-2组与shRNA-YAP-4组YAP mRNA表达明显降低,在SMMC-7721中shRNA-YAP-2组与shRNA-YAP-4组的YAP mRNA及蛋白表达水平分别为(0.871 ±0.081,0.106±0.013)和(1.010±0.097,0.192±0.013),与未转染组(2.399±0.148,0.372±0.007)比较差异有统计学意义(P＜0.01).MTT显示,shRNA-YAP-2、shRNA-YAP-4组细胞生长明显抑制,但未出现阻滞；流式细胞仪分析显示,shRNA-YAP-2组和shRNA-YAP-4组细胞凋亡率分别为(12.0±0.81)％和(5.03±1.01)％,明显高于空质粒组的(2.89±0.08)％(P＜0.01).细胞被阻滞在G2期,GgG1期出现DNA亚二倍体峰.结论 运用shRNA干扰技术,可以有效地干扰肝癌SMMC-7721细胞YAP的表达并能降低YAP的生成,抑制SMMC-7721细胞的增殖和促进细胞的凋亡.
肝肿瘤、细胞增殖、细胞凋亡、短发夹RNA、YAP(yes相关蛋白)
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R73;R28
山西省自然科学基金2012011038-6
2013-10-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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1117-1120,后插1
