胃泌素释放肽前体融合蛋白的制备及其在肿瘤研究中的应用

摘要：

目的 克隆胃泌素释放肽前体(pro-GRP)基因、构建重组质粒pGEM-T-pro-GRP和表达载体PMS-31b-pro-GRP、在大肠杆菌中热诱导表达并制备融合蛋白.方法 从BGC823胃癌细胞中提取总RNA,利用pro-GRP特异引物,扩增人pro-GRP分子的cDNA全长.将pro-GRP基因定向克隆于pGEM-T载体转化JM109,DNA测序鉴定基因序列.将pro-GRP基因定向克隆于原核高效表达载体PMS-31b,转化大肠杆菌POP2136经42℃热诱导表达MS2-pro-GRP融合蛋白.将融合蛋白分离纯化后,十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)凝胶鉴定.结果 经聚合酶链反应(PCR)扩增成功获得210 bp的pro-GRP基因,目的 基因序列正确.SDS-PAGE显示热诱导后表达的融合蛋白分子量约为18 000.结论 成功克隆pro-GRP基因,并表达和纯化了PMS-31b-pro-GRP融合蛋白,为建立pro-GRP检测方法奠定了基础.

关键词：胃泌素释放肽、克隆、制备、应用

所属期刊栏目：7

分类号：R9(药学)

资助基金：北京市科委科研项目953850500

在线出版日期：2008-01-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：828-831