外标准法实时定量反转录-聚合酶链反应方法的建立

摘要：

目的为了检测BALB/C小鼠甲状腺促甲状腺激素受体(TSHR)表达,建立外标准法实时定量反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法.方法取正常BALB/C小鼠甲状腺提取甲状腺总RNA,逆转录后进行PCR,PCR产物经回收纯化后作为real-time PCR的标准品,制作标准曲线,优化反应条件使溶解曲线有特异扩增.检测豚鼠TSHR分子免疫的BALB/C小鼠甲状腺TSHR mRNA的表达.结果建立的外标准法SYBR GREENⅠ实时定量RT-PCR方法可以灵敏检测到10 copies的核酸,灵敏度为普通PCR的104倍;溶解曲线只有特异峰;不同标准点批间变异系数范围为5.8%～14.3%(n=6).与对照组比较,TSHR大分子免疫的BALB/C小鼠甲状腺组织TSHR mRNA水平显著升高(P＜0.05).结论外标准法实时定量RT-PCR具有灵敏度高、特异性强、重复性好的特点,可精确地检测出小鼠甲状腺组织TSHR mRNA的水平.

关键词：逆转录聚合酶链反应、受体、促甲状腺激素、小鼠、近交BALB/C

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分类号：R9(药学)

资助基金：中国科学院资助项目30370682;天津市科技发展基金05YFGDSF02700;天津医科大学校科研和教改项目2005KY13

在线出版日期：2006-03-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：18-20