异种移植模型转人α1,2岩藻糖基转移酶基因小鼠显微注射DNA片段的制备

摘要：

目的制备转人α1,2岩藻糖基转移酶(HT)基因小鼠显微注射DNA片段.方法引物两端设计酶切识别位点,聚合酶链反应(PCR)扩增HT cDNA全长序列,两端含有EcoR Ⅰ和BamH Ⅰ酶切识序列;回收HTcDNA片段并与PMD18-T载体连接,EcoR Ⅰ和BamH Ⅰ双酶切纯化质粒鉴定;EcoR Ⅰ和BamH Ⅰ双酶切pMD18-HT cDNA重组质粒和pCMV-MCS质粒,回收HT cDNA片段和pCMV-MCS质粒片段,进而连接,转化感受态细菌,纯化质粒对其进行酶切、PCR和测序鉴定;Pvu Ⅰ和Not Ⅰ依次单酶切重组质粒pCMV-MCS-HT cDNA,回收大小约2.85kb片段,溶于适量显微注射用缓冲液.结果成功构建了重组质粒pCMV-MCS-HT cDNA,酶切回收了2.85kb的显微注射DNA片段.结论通过基因工程技术可以获得转人HT基因小鼠显微注射DNA片段,包含基因表达元件,可以用于显微注射法建立转人HT基因小鼠.

关键词：异种移植、α1、2岩藻糖基转移酶、基因转移、显微注射

所属期刊栏目：4

分类号：R6(外科学)

资助基金：天津市科委科研项目043803411

在线出版日期：2005-01-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：912-915