TCAB1基因RNAi慢病毒载体的构建及在人子宫内膜间质细胞中沉默TCAB1基因的效应

摘要：

目的 构建TCAB1基因RNAi慢病毒载体,为子宫内膜异位症(EMs)的基因靶向治疗提供理论依据.方法 化学合成3条靶向TCAB1基因的siRNA,转染HEK - 293T细胞,24h后采用荧光素酶报告系统筛选有效siRNA,其对TCAB1mRNA有明显抑制作用.针对已经筛选确定的TCAB1基因RNAi有效靶序列,合成靶序列的Oligo DNA,退火形成双链DNA,与经XhoI和HpaI酶切后的LV1载体[含U6启动子和绿色荧光蛋白(GFP)]连接产生LV1 - shRNA慢病毒载体,PCR筛选阳性克隆,测序鉴定.用LV1 - shRNA、pRev、pVsvg、pcgv四质粒共转染包装细胞HEK - 293T细胞,包装产生慢病毒,分别于转染后48h、72h收取病毒上清,感染人子宫内膜间质细胞(ESC),进行RT - qPCR检测TCAB1基因相对表达量,检测LV1 - shRNA干扰效率.结果 PCR和测序证实,成功构建TCAB1 shRNA的慢病毒载体LV1 - shRNA.结论 成功构建TCAB1基因的RNAi慢病毒载体,其转染ESC细胞后显著抑制了TCAB1的表达,为子宫内膜异位症的基因靶向治疗提供了实验基础.

关键词：TCAB1、shRNA、RNA干扰、慢病毒载体、子宫内膜异位症

所属期刊栏目：20

分类号：R394.3

资助基金：南京市医学重点科技发展项目ZKX10019:国家自然科学基金81100405

在线出版日期：2013-01-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：6-8