siRNA表达载体介导靶向NADH-细胞色素b5还原酶基因的RNA干扰实验研究

摘要：

目的 探索经载体介导的RNA干扰抑制人NADH-细胞色素b5还原酶(b5R)基因表达的可行性.方法 应用网络在线软件设计并合成两条针对b5R mRNA的RNA干扰的DNA模板片段,分别将其克隆至经过改建、带有neo基因的pSilencer1.0-U6载体上,构建成siRNA真核表达载体;脂质体转染法将上述重组质粒转入人肺成纤维细胞和BEL-7402肝癌细胞株.通过半定量RT-PCR和荧光定量RT-PCR分析,检测所构建的重组siRNA真核表达载体对b5R基因表达的干扰效应.结果 获得两个能在细胞内生成靶向b5R基因siRNA的重组栽体pSib5R-1和pSibSR-2;其中psib5R-2时成纤维细胞b5R mRNA的抑制率达81.7%,对BEL-7402细胞b5R mRNA的抑制率达60%.结论 两种细胞b5R基因的表达均可被载体介导的RNA干扰有效抑制;成功构建了针对b5R基因的siRNA表达载体,为建立稳定表达siRNA的、b5R酶缺陷的细胞模型提供了实验基础.

关键词：NADH-细胞色素b5还原酶、隐性先天性高铁血红蛋白血症、RNA干扰、小干扰RNA

所属期刊栏目：16

分类号：R394.34

在线出版日期：2008-05-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：27-32