甘蓝型油菜和甘蓝CRISPR/Cas9编辑效果的快速检测

摘要：

CRISPR/Cas9系统是目前最常用的基因组定点编辑工具,通过瞬时表达试验提前验证Cas9/sgRNA载体诱导的突变效率,可以提高基因组定点编辑的成功率,且显著节省费用及时间.本研究开发了一种利用农杆菌介导的操作简单、适用性好、成本低廉的叶片瞬时表达技术,可用于快速检测甘蓝型油菜和甘蓝中CRISPR/Cas9的编辑效果.针对甘蓝型油菜Bna C. WRKY11. a基因设计了2个靶位点Tgt1(Target 1)和Tgt2(Target 2),并构建了Cas9/sgRNA-Tgt1/2多重突变载体,在甘蓝型油菜叶片中瞬时表达后,2个靶位点都出现突变,突变效率达11.2％～82.2％.针对甘蓝Bol PDS3基因设计了1个靶位点Tgt3(Target3),并构建了Cas9/sgRNA-Tgt3敲除载体,在甘蓝叶片瞬时表达后,Tgt3发生了突变,且大部分为碱基缺失突变,缺失的数目为1～18bp不等,同时还存在少量碱基插入以及碱基替换等突变类型.结果表明这种甘蓝型油菜和甘蓝的叶片瞬时表达技术操作简单、适用性好、成本低廉,可用于CRISPR/Cas9的编辑效果快速检测.

关键词：CRISPR/Cas9、甘蓝型油菜、甘蓝、基因组编辑、突变检测

所属期刊栏目：40

分类号：S565.403(经济作物)

资助基金：国家重点研发计划2016YFD0102000;国家自然科学基金31601330,31741097

在线出版日期：2019-05-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：737-744