大豆小片段法HRM基因分型体系优化

摘要：

应用高分辨率熔解曲线（ high resolution melting curve，HRM）技术进行基因分型简单有效，灵敏度高、特异性强。优化并建立基于HRM的大豆SNP基因分型体系，是准确进行SNP研究的前提和基础。本研究利用添加内标后的小片段法进行SNP基因分型体系优化研究，结果表明在设计SNP引物时，最好使其PCR产物长度为50~80bp，熔解温度在72~82℃，Tm值介于55~62℃之间；10μL PCR反应体系中应包含25ng DNA模板，0.6pmol SNP引物，1μL LC Green染料；PCR反应后，应在各点样孔分别加入3pmol的高、低温内标，然后进行变性处理和HRM分析。同时利用建立的基因分型体系对重组自交系群体（ RIL）进行了基因分型检测，能完全将其分成亲本的两种基因型，提高了SNP基因分型的准确性和效率。本研究建立的SNP基因分型体系为今后进行大豆SNP标记开发、高密度遗传图谱构建、QTL定位等研究提供了基础。

关键词：大豆、SNP、HRM、基因分型、小片段法

分类号：S565.103(经济作物)

资助基金：国家大豆遗传改良工程项目2015ZX08004；国家科技部支撑计划2014BAD22B00；国家863计划2012AA101106-1-9，

在线出版日期：2015-09-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：453-461