重组人α-半乳糖苷酶在悬浮CHO-S细胞中的表达、纯化及功能活性鉴定

摘要：

目的 运用无血清可高密度悬浮培养的中国仓鼠卵巢细胞(Chinese hamster ovary cells,CHO-S)表达体系,分泌表达并纯化重组人α-半乳糖苷酶(recombinant human α-galac-tosidase A,rhα-Gal A),验证其对法布雷病贮积底物神经酰胺三己糖苷(globotriaosylceramide,Gb3 or GL3)的清除效果.方法 构建人α-半乳糖苷酶基因gla融合6×His标签的表达载体pcDNA4-GLA,将其转染至悬浮CHO-S细胞中,表达纯化并检测rhα-Gal A糖基化形式、表达量及酶活性;通过与人皮肤成纤维细胞共孵育,观察rhα-Gal A是否能被摄取到胞内并有效清除Gb3.结果 研究结果显示,rhα-Gal A成功在CHO-S细胞中表达,表达量最高可达(100±20.6)mg·L-1,且rhα-Gal A被糖基化修饰,酶活与商品酶Fabrazyme酶活相近,为(59±9.1)kU·g-1;此外,rhα-Gal A能被有效摄取到人成纤维细胞胞内并靶向溶酶体进而有效清除Gb3.结论 利用瞬时转染技术在悬浮CHO-S细胞中成功表达并纯化出rhα-Gal A,具有良好的生物学活性且可有效清除Gb3,为我国法布雷病的酶替代疗法提供新的选择.

关键词：重组人α-半乳糖苷酶、法布雷病、酶替代疗法、悬浮CHO-S细胞、溶酶体贮积症、基因工程

所属期刊栏目：39

分类号：R329.24;R345.62;R394.2;R589;R977.3(人体形态学)

资助基金：国家重点研发计划;广东省重点领域研发计划项目;广东省珠江人才计划;国家自然科学基金

在线出版日期：2023-04-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：774-781