含蜂毒肽的前列腺癌外泌体制备及体外评价

摘要：

目的 构建含蜂毒肽的前列腺癌外泌体体系,并观察前列腺癌细胞对其摄取能力.方法 筛选不同时间饥饿处理的细胞用于提取外泌体;应用超速离心法提取PC-3细胞的外泌体,并通过透射电镜、纳米颗粒跟踪分析仪(NTA)以及Western blot法对所提颗粒进行检测;采用反复冻融法、室温孵育法以及电穿孔法分别制备蜂毒肽外泌体体系,并利用离心法测其包封率大小;应用高效液相色谱法(HPLC)建立蜂毒肽外泌体(EXO-MEL)的含量测定方法;应用荧光倒置显微镜观察PC-3细胞、DU145细胞以及LNCaP细胞对蜂毒肽外泌体的摄取情况.结果 饥饿处理24 h为最佳外泌体提取时间点;透射电镜结果显示,外泌体外形呈圆形或椭圆形,具有明显的膜性结构,直径在100 nm左右;NTA分析外泌体的试剂蛋白浓度为0.222 g·L-1;Western blot检测外泌体的标志蛋白结果显示Alix、CD63为阳性表达,提示采用饥饿培养PC-3细胞,结合超速离心法提取可获得外泌体.包封率检测结果表明:电穿孔法的包封率为17.51％ ±2.39％、反复冻融法为11.46％ ±1.02％、室温孵育法为3.93％±2.44％,电穿孔法包封率最大且有明显差异(P<0.05).摄取实验表明,PC-3细胞可以有效摄取EXO-MEL,其摄取程度有一定的时间依赖性;DU145以及LNCaP细胞也能摄取EXO-MEL.结论 通过饥饿处理加高速离心法可成功获取前列腺癌外泌体,通过电穿孔法制备的蜂毒肽外泌体体系可以被前列腺癌细胞摄取.

关键词：前列腺癌、外泌体、蜂毒肽、PC-3细胞、载药方式、电穿孔法

所属期刊栏目：39

分类号：R329.24;R737.25;R996.3(人体形态学)

在线出版日期：2023-02-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：392-399