RIP140重组腺病毒的构建及在乳鼠心肌细胞中的表达

摘要：

目的：原代乳鼠心肌细胞为终末期的分化细胞，常规的质粒转染效率低下。受体相互作用蛋白140（receptor-in-teracting protein 140，RIP140）目的基因长达3.5kb，为研究RIP140蛋白在非增殖型的心肌细胞表达情况，需要寻找一种更好的过表达系统。方法 RIP140基因全长序列克隆入pAdTrack-CMV穿梭载体中，在BJ5183细菌中与腺病毒骨架载体pAdEasy-1进行同源重组。经酶切及测序验证的阳性重组克隆转染入AD293细胞中进行病毒的包装与扩增。采用TCID50法测定病毒滴度、CCK-8试剂盒分析腺病毒对心肌细胞活力的影响。采用Western blot鉴定RIP140蛋白在心肌细胞中的表达情况。结果测序分析结果表明RIP140的全长序列正确克隆到 AdEasyTM腺病毒系统中。Ad-RIP140、Ad-GFP 的病毒滴度分别为1011.3和1011.7 PFU · mL－1。腺病毒感染复数在200以下时，对心肌细胞活力无影响。绿色荧光及Western blot分析显示Ad-RIP140感染心肌细胞12 h，RIP140表达明显增加（P＜0.05）。结论成功构建了RIP140全长序列的腺病毒载体，并使其蛋白有效表达于心肌细胞中，这将有助于后续进行RIP140在心肌细胞中的作用的研究。

关键词：腺病毒、同源重组、感染复数、细胞病理效应、半数组织感染剂量、心肌细胞

所属期刊栏目：32

分类号：R39;R73

资助基金：国家自然科学基金资助项目81402923

在线出版日期：2017-01-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：1735-1740