尼可地尔对抗高糖引起的H9 c2心肌细胞损伤和炎症反应

摘要：

目的探讨尼可地尔（nicorandil，Nic）能否通过调控核因子-κB（nuclear factorκB，NF-κB）／环氧化酶-2（cyclooxyge-nase-2，COX-2）通路对抗高糖引起的H9c2心肌细胞损伤和炎症。方法应用细胞计数盒（CCK-8）检测心肌细胞存活率；蛋白质免疫印迹法测定NF-κB、COX-2和cleaved caspase-3蛋白的表达水平；乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase，LDH）试剂盒检测细胞培养液中LDH的活性；双氯荧光素染色荧光显微镜照相法测定胞内活性氧（reactive oxygen species， ROS）水平；Hoechst 33258核染色荧光显微镜照相法测定凋亡细胞数量；罗丹明123染色荧光显微镜照相法检测线粒体膜电位（mitochondrial membrane potential，MMP）；ELISA 法检测细胞培养液中白介素-1β（IL-1β）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的水平。结果35 mmol·L－1葡萄糖（高糖，HG）作用H9 c2心肌细胞24 h能明显降低心肌细胞存活率。在HG作用前，应用20～100μmol·L－1 Nic 预处理60 min或50μmol·L－1 Nic预处理30～120 min均可明显对抗HG对心肌细胞存活率的抑制作用。另一方面，HG可上调心肌细胞磷酸化（p）-NF-κB p65和 COX-2的表达，50μmol·L－1 Nic预处理心肌细胞60 min能抑制HG诱导的p-NF-κB p65和COX-2表达的上调。此外，HG作用心肌细胞24 h可引起明显的心肌细胞损伤和炎症反应，使培养液中 LDH 活性、ROS生成、凋亡细胞数量、cleaved caspase-3表达、MMP丢失及炎症因子IL-1β和TNF-α的分泌均增加；在HG作用前，应用50μmol·L－1 Nic预处理心肌细胞60 min或应用100μmol·L－1 PDTC（NF-κB 抑制剂）或10μmol·L－1 NS-398&nbsp；（COX-2抑制剂）和 HG共处理心肌细胞24 h 能明显拮抗HG引起的上述损伤和炎症反应。结论 Nic通过抑制NF-κB／COX-2通路对抗HG引起的H9 c2心肌细胞损伤和炎症。

关键词：尼可地尔、核因子-κB、环氧化酶-2、高糖、心肌细胞、损伤、炎症

所属期刊栏目：32

分类号：R-332;R322.11;R329.24;R345.4;R364.5;R392.11(医学研究方法)

资助基金：国家自然科学基金资助项目No 81270296；广东省财政科技项目2014SC107

在线出版日期：2017-01-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：1657-1664,1665