慢病毒介导的干扰ClC-3肝癌稳定细胞株的建立及其侵袭和迁移能力的改变

摘要：

目的建立慢病毒介导的靶向干扰电压门控氯通道3(voltage-gated chloride channel 3,ClC-3)的稳定肝癌细胞株,并探讨其侵袭和迁移能力的改变。方法构建靶向 ClC-3的3个短发夹状RNA ( short-hairpin RNA, shRNA)慢病毒表达载体,293FT细胞包装慢病毒并测定滴度。重组慢病毒感染肝癌细胞株MHCC97H,筛选稳定干扰细胞株。实时荧光定量PCR和Western blot检测ClC-3 mRNA和蛋白的表达以确定干扰效率。 Transwell小室实验(含Matrigel和不含Ma-trigel)和细胞划痕实验检测ClC-3基因被抑制后侵袭和迁移能力的改变。结果成功获得4种慢病毒,感染MHCC97细胞后,建立1株阴性对照细胞和3株 ClC-3稳定干扰细胞( MHCC97H/shClC-3-1、shClC-3-2和 shClC-3-3)。3株稳定干扰细胞ClC-3 mRNA和蛋白表达水平明显低于阴性对照细胞(P<0．01),MHCC97H/shClC-3-2细胞对ClC-3的抑制效果最好。与阴性对照细胞相比,MHCC97H/shClC-3-2细胞侵袭和迁移能力都下降( P<0．01)。结论成功建立稳定干扰ClC-3基因的肝癌细胞株,ClC-3表达抑制会降低MH-CC97H细胞的侵袭和迁移能力。

关键词：电压门控氯通道3、肝癌细胞、慢病毒载体、RNA干扰、稳定细胞株、迁移、侵袭

分类号：R373.9;R394.2;R73-37;R735.702.2(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：国家自然科学基金资助项目31371144,81101666

在线出版日期：2015-09-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：1101-1107