STAT5b靶控报告基因检测胰岛素受体激酶活性细胞模型的建立

摘要：

目的 建立方便快捷的检测胰岛素受体激酶活性的方法,为筛选抗糖尿病的药物提供一种新的细胞模型.方法 用克隆有胰岛素受体基因、STAT5b基因和STATS响应元件靶控的荧光素酶报告基因的质粒共转染CHO细胞,RT-PCR检测外源基因的表达.转染的细胞经胰岛素处理,考察胰岛素对报告基因表达的剂量和时间效应,并采用AG1024处理和PTP1B基因共转染考察模型的特异性.结果 经瞬时共转染的CHO细胞中检测到胰岛素受体和STAT5b基因表达,转染细胞中荧光素酶表达受胰岛素诱导且呈浓度依赖性和时间依赖性,最高诱导表达率为6.25倍.胰岛素受体酪氨酸激酶特异性抑制剂AG1024和酪氨酸磷酸化酶1B(PTP1B)可特异地阻断胰岛素的对荧光素酶表达的诱导效应.结论 该细胞模型通过报告基因表达检测胰岛素受体激酶活性,灵敏性高、特异性强,在胰岛素受体激动剂和增敏剂的筛选方面具有应用价值.

关键词：胰岛素受体激酶、STAT5b、报告基因、细胞模型

所属期刊栏目：25

分类号：R329.2;R345.57;R394.2;R965.1(人体形态学)

资助基金：四川省教育厅自然科学重点资助项目川教计2004A115;四川省科技厅攻关资助项目05SG011-02

在线出版日期：2009-04-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：267-269