10.3321/j.issn:1001-1978.2003.10.020
重组小鼠CK2α亚基在大肠杆菌中的表达、纯化及活性测定
目的研究重组小鼠CK2α亚基在大肠杆菌中的表达,并进行纯化和活性的测定.方法将已构建成功的小鼠蛋白激酶CK2α亚基cDNA的重组质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3), IPTG诱导表达,产物依次进行DE-52、P11磷酸纤维素和肝素-Sepharose柱层析分离, SDS-PAGE银染.结果重组质粒转化表达菌经IPTG诱导后出现一分子量为42 ku蛋白过度表达,表达蛋白约占菌体总蛋白的30.6 %.从287 mg可溶性蛋白质中得到4.7 mg纯化蛋白.SDS-PAGE银染显示纯化的蛋白为单一蛋白带.纯化的CK2α和β亚基等摩尔分子混合可组成有完全活性的全酶.重组的CK2全酶的性质和功能与该酶的已知特性一致.结论重组蛋白是小鼠蛋白激酶CK2α亚基.
蛋白激酶CK2α亚基/小鼠、原核表达、蛋白质纯化
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R345.57;R378.21;R394.2;R446(人体生物化学、分子生物学)
广东省自然科学基金011766;广东省科技厅科技计划2002C30109;广东省湛江市科技计划
2003-11-07(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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