10.12007/j.issn.0258-4646.2022.08.004
α-半乳糖苷酶A基因敲除猪胎儿成纤维细胞系的建立
目的 基于CRISPR/Cas9技术构建α-半乳糖苷酶A?(GLA)?基因敲除的巴马公猪胎儿成纤维细胞?(PFFs),为构建人类Fabry病猪模型提供实验材料.方法 利用生物信息学方法对人/猪GLA基因编码的α-Gal?A的相似性进行分析,并鉴定出猪α-Gal?A的催化残基位置.通过在线工具在编码催化残基之前的外显子区设计单链向导RNA,构建CRISPR/Cas9打靶载体.将打靶载体与抗性质粒共转染至巴马公猪胎儿PFFs,用G418药物筛选出单克隆细胞,并PCR测序鉴定.结果 人/猪α-Gal?A的氨基酸序列一致性为81%,相似性为89%;?三维结构的均方根偏差值为0.012.猪α-Gal?A的催化残基是第174位和第235位的天冬氨酸.成功构建CRISPR/Cas9打靶载体,并筛选出单克隆细胞,PCR测序鉴定其基因型.结论 用生物信息学方法验证了人/猪α-Gal?A具有高度的相似性.利用CRISPR/Cas9技术获得了GLA基因敲除的巴马公猪PFFs细胞系,为构建人类Fabry病猪模型奠定了基础.
Fabry病、α-半乳糖苷酶A基因、α-半乳糖苷酶A、CRISPR/Cas9、猪胎儿成纤维细胞
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Q785(基因工程(遗传工程))
国家自然科学基金81874144
2022-08-18(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
共7页
688-694