α-半乳糖苷酶A基因敲除猪胎儿成纤维细胞系的建立

摘要：

目的 基于CRISPR/Cas9技术构建α-半乳糖苷酶A?(GLA)?基因敲除的巴马公猪胎儿成纤维细胞?(PFFs),为构建人类Fabry病猪模型提供实验材料.方法 利用生物信息学方法对人/猪GLA基因编码的α-Gal?A的相似性进行分析,并鉴定出猪α-Gal?A的催化残基位置.通过在线工具在编码催化残基之前的外显子区设计单链向导RNA,构建CRISPR/Cas9打靶载体.将打靶载体与抗性质粒共转染至巴马公猪胎儿PFFs,用G418药物筛选出单克隆细胞,并PCR测序鉴定.结果 人/猪α-Gal?A的氨基酸序列一致性为81％,相似性为89％;?三维结构的均方根偏差值为0.012.猪α-Gal?A的催化残基是第174位和第235位的天冬氨酸.成功构建CRISPR/Cas9打靶载体,并筛选出单克隆细胞,PCR测序鉴定其基因型.结论 用生物信息学方法验证了人/猪α-Gal?A具有高度的相似性.利用CRISPR/Cas9技术获得了GLA基因敲除的巴马公猪PFFs细胞系,为构建人类Fabry病猪模型奠定了基础.

关键词：Fabry病、α-半乳糖苷酶A基因、α-半乳糖苷酶A、CRISPR/Cas9、猪胎儿成纤维细胞

所属期刊栏目：51

分类号：Q785(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家自然科学基金81874144

在线出版日期：2022-08-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：688-694