钙调蛋白N2和C2突变体载体的构建、表达纯化和鉴定

摘要：

目的 构建钙调蛋白(CaM)N2和C2突变体的表达性载体,表达纯化并进行活性鉴定,为进一步研究CaM与钙通道片段的相互作用奠定基础.方法 将CaM的N?lobe和C?lobe的cDNA分别与相应的N?lobe和C?lobe的cDNA相连,制备N2和C2突变体的cDNA.将N2和C2的cDNA分别插入pGEX?6p?3载体,并将重组质粒转入E.coli BL21菌株,IPTG诱导转化成功的菌株表达GST融合蛋白,超声破碎法提取,GS?4B beads纯化,SDS?PAGE电泳鉴定目的蛋白相对分子质量及纯度,pull?down实验鉴定活性.结果 酶切鉴定以及DNA测序结果证实重组质粒构建成功;SDS?PAGE电泳图显示突变体蛋白纯度和浓度均较高;pull?down实验结果证明突变体蛋白有生理活性,能与钙通道片段结合.结论 本研究成功构建了N2和C2表达质粒,并提取、纯化了有活性的钙调蛋白N2和C2突变体.

关键词：钙调蛋白、N?lobe、C?lobe、N2、C2、pull?down实验

所属期刊栏目：46

分类号：R96(药理学)

资助基金：国家自然科学基金31471091;大学生创新计划项目201610159052,201510159047,2015048,2015023

在线出版日期：2017-06-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：401-405