心肌Cav1.2钙通道NT片段的提取纯化及其与CaM的相互作用

摘要：

目的 探讨心肌Cav1.2钙通道NT蛋白片段提取与纯化的方法 ,并研究其与CaM的相互作用.方法将NT的cDNA插入pGEX?6p?3质粒载体后,转化大肠杆菌BL?21感受态细胞,大量培养并利用异丙基硫代?β?D半乳糖苷(IPTG)诱导NT的GST融合蛋白表达,GS?4B beads分离纯化,PreScission蛋白酶切除GST标签,进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰氨凝胶电泳(SDS?PAGE)检测蛋白纯度和相对分子质量.采用GST pull?down实验研究NT片段与CaM的相互作用.结果 SDS?PAGE结果显示成功纯化获得NT蛋白片段,且具有较高的纯度.GST pull?down实验结果显示NT可与CaM结合,且具有浓度依赖性.结论 本研究成功制备与纯化了心肌Cav1.2钙通道NT蛋白片段,为深入研究蛋白相互作用及NT的生物学功能奠定了基础.

关键词：NT、提取、纯化、CaM、GSTpull?down实验

所属期刊栏目：46

分类号：R96(药理学)

资助基金：国家自然科学基金31400981,31471091;大学生创新计划项目2015069,201510159068,201510159047,201610159000064

在线出版日期：2017-06-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：397-400