针对小鼠Chmp1b基因的可诱导shRNA表达转基因载体的构建及功能鉴定

摘要：

目的 设计构建针对小鼠Chmp1b基因的可诱导shRNA表达转基因载体,以用于制备相关转基因小鼠,并在体外验证其有效性.方法 剔除pcDNA3.1载体的CMV启动予以及多克隆位点,然后接入带有LacZ-fLoxP插入失活的小鼠U6启动子并引入适当的酶切位点,装入设计好的shRNA片段,测试shRNA抑制Chmp1b表达的效率与专一性,检查Cre重组酶介导位点特异性重组去除LoxP位点之间的lac基因后U6启动子活性恢复情况.结果 设计的shRNA片段可明显降低Chmp1b的表达,抑制效率达90％以上;成功构建针对小鼠Chmp1b基因的可诱导shRNA表达转基因载体,插入U6启动子中的LacZ-fLoxP片段既可以控制U6启动子活性又可以起到报告基因的作用.结论 针对小鼠Chmp1b基因的可诱导shRNA表达转基因载体可以用于制备相关转基因小鼠.

关键词：shRNA、Chmp1b、Cre/LoxP、转基因载体、构建

所属期刊栏目：45

分类号：Q28(细胞生物学)

资助基金：国家自然科学基金31271231,30600211

在线出版日期：2017-01-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：968-972,976